顯微鏡物鏡數(shù)值孔徑與分辨率

顯微鏡物鏡數(shù)值孔徑與分辨率

    顯微鏡物鏡光學(xué)系統(tǒng)的數(shù)值孔徑（NA）是一個無量綱的數(shù)，用以衡量該系統(tǒng)能夠收集的光的角度范圍。在光學(xué)的不同領(lǐng)域，數(shù)值孔徑的精確定義略有不同。在光學(xué)顯微鏡領(lǐng)域，數(shù)值孔徑描述了物鏡收光錐角的大小，而后者決定了顯微鏡收光能力和空間分辨率；在光纖領(lǐng)域，數(shù)值孔徑則描述了光進出光纖時的錐角大小。

    其大小由下式?jīng)Q定：NA = n * sin α，其中 n 是被觀察物體與物鏡之間介質(zhì)的折射率；α 是物鏡孔徑角（2α）的一半。物鏡孔徑角是指：物鏡光軸上的物體點與物鏡前透鏡的有效直徑所形成的角度。

1． 數(shù)值孔徑

　　數(shù)值孔徑簡寫NA，數(shù)值孔徑是物鏡和聚光鏡的主要技術(shù)參數(shù)，是判斷兩者（尤其對物鏡而言）性能高低的重要標(biāo)志。其數(shù)值的大小，分別標(biāo)刻在物鏡和聚光鏡的外殼上。

　　數(shù)值孔徑（NA）是物鏡前透鏡與被檢物體之間介質(zhì)的折射率（n）和孔徑角（u）半數(shù)的正弦之乘積。用公式表示如下：NA=nsinu/2。

    孔徑角又稱"鏡口角"，是物鏡光軸上的物體點與物鏡前透鏡的有效直徑所形成的角度?？讖浇窃酱螅M入物鏡的光通亮就越大，它與物鏡的有效直徑成正比，與焦點的距離成反比。

　　顯微鏡觀察時，若想增大NA值，孔徑角是無法增大的，唯一的辦法是增大介質(zhì)的折射率n值?；谶@一原理，就產(chǎn)生了水浸物鏡和油浸物鏡，因介質(zhì)的折射率n值大于1，NA值就能大于1。

    數(shù)值孔徑最大值為1.4，這個數(shù)值在理論上和技術(shù)上都達到了極限。目前，有用折射率高的溴萘作介質(zhì)，溴萘的折射率為1.66,所以NA值可大于1.4。

　　這里必須指出，為了充分發(fā)揮物鏡數(shù)值孔徑的作用，在觀察時，聚光鏡的NA值應(yīng)等于或略大于物鏡的NA值。

　　數(shù)值孔徑與其他技術(shù)參數(shù)有著密切的關(guān)系，它幾乎決定和影響著其他各項技術(shù)參數(shù)。它與分辨率成正比，與放大率成正比，與焦深成反比，NA值增大，視場寬度與工作距離都會相應(yīng)地變小。

2． 分辨率

　　顯微鏡的分辨率是指能被顯微鏡清晰區(qū)分的兩個物點的最小間距，又稱"鑒別率"。其計算公式是σ=λ/NA 式中σ為最小分辨距離；λ為光線的波長；NA為物鏡的數(shù)值孔徑?？梢娢镧R的分辨率是由物鏡的NA值與照明光源的波長兩個因素決定。NA值越大，照明光線波長越短，則σ值越小，分辨率就越高。

要提高分辨率，即減小σ值，可采取以下措施：

（1） 降低波長λ值，使用短波長光源；

（2） 增大介質(zhì)n值以提高NA值（NA=nsinu/2）；

（3） 增大孔徑角u值以提高NA值；

（4） 增加明暗反差。