光學(xué)顯微鏡下幾種照明方式的特點分析

光學(xué)顯微鏡下幾種照明方式的特點分析

光學(xué)顯微鏡的照明方式是指顯微鏡在不同的應(yīng)用領(lǐng)域中，根據(jù)所研究樣品的性質(zhì)以及規(guī)格尺寸的不同，所要采取的一種方便觀察的照明方式，其中我們今天要說的就是光學(xué)顯微鏡下幾種常見的照明方式的特點。我們常見的幾種照明方式有：明場照明、暗場照明、斜照明、萊茵伯格照明（暗場照明的另一種形式）等。我們來進行逐一分析。

明場照明

明場照明是光學(xué)顯微鏡中最簡單的一種照明方式。常見的是在倒置顯微鏡應(yīng)用中，只需采用白光對樣品進行照射即可。所成圖像的對比度取決于樣品各部位對光的吸收效果。采用這種照明方式的缺點是大多數(shù)生物樣品的對比度都很低，并且會由于離焦信息的干擾導(dǎo)致分辨率也較低；優(yōu)點是設(shè)備簡單，樣品也無需進行加工處理。

暗場照明

使用暗場照明方式的暗場顯微鏡通過采集樣品散射的光線來提高無色透明樣品的圖像對比度。在實際使用中為了只收集樣品的散射光，暗場照明方式需要采用準(zhǔn)直光源將進入像平面的透射光（未散射的部分）強度降到最低。相比前兩種照明方式，暗場照明方式缺點是光強較弱導(dǎo)致的成像時間過長。

斜照明

相較于明場照明和暗場照明，斜照明方式的成像立體感要高一點，其優(yōu)點是能夠使樣品的圖像產(chǎn)生一種三維效果，從而將樣品中一些原本看不到的結(jié)構(gòu)凸顯出來。目前常用的“霍爾曼調(diào)制對比度”技術(shù)就是基于斜照明方式的基礎(chǔ)上發(fā)展而來。斜照明方式一般用在細胞培養(yǎng)室中的倒置顯微鏡中。其缺點和明場類似，因此采用斜照明方式并不能顯著提高對比度和分辨率。

萊茵伯格照明

萊因伯格照明方式實際上是暗場照明的一種特殊形式。主要區(qū)別僅僅只是在光源通過聚光器的路上插入彩色的透明濾光片，從而可以用顏色來區(qū)分樣品中不同空間的成分，例如可將有結(jié)構(gòu)的樣品顯示為紅色，而均勻的背景則顯示為藍色，或者其它不同顏色的組合。