革蘭氏染色法的步驟

革蘭氏染色法的步驟

生物顯微鏡做細(xì)菌鏡檢或者做菌種鑒定的時(shí)候都需要進(jìn)行染色，革蘭氏染色是進(jìn)行細(xì)菌觀察的一個(gè)非常常用的染色方式，現(xiàn)在就由上海巴拓儀器有限公司介紹一下革蘭氏染色法的步驟。

原理：革蘭氏染色法可將所有的細(xì)菌區(qū)分為革蘭氏陽性菌du（G+）和革蘭氏陰性菌（G-）兩大類，是細(xì)菌學(xué)上最常用的鑒別染色法。該染色法之所以能將細(xì)菌分為G+菌和G-菌，是因?yàn)橐话阏J(rèn)為革蘭氏染色是基于細(xì)菌細(xì)胞壁特殊化學(xué)組分進(jìn)行染色的。

步驟：

(一)涂片固定

在干凈的載玻片中央滴加一滴蒸餾水，用接種環(huán)進(jìn)行無菌操作，挑取培養(yǎng)物少許，置載玻片的水滴中，與水混合做成菌懸液并涂布成直徑約1cm的薄層。

(二)染色

在固定過的涂片菌膜上滴加草酸銨結(jié)晶紫染液，染色液應(yīng)完全覆蓋整個(gè)菌膜，染色1min。

(三)水洗

染色到一定的時(shí)間，拿住玻片使之成450角，用細(xì)小的水流把多余的染料沖洗掉，被菌體吸附的染料則保留。

(四)媒染

加碘液覆蓋涂面染1 min。在媒染處理時(shí)，媒染劑與染料形成不溶性的化合物，可增加染料和細(xì)菌的親和力。

(五)水洗，用吸水紙吸去水分

用細(xì)小的水流緩慢沖洗涂片上的染色液，用吸水紙吸干。

(六)脫色

加95%酒精數(shù)滴，并輕輕搖動(dòng)進(jìn)行脫色， 20 s~30 s后再進(jìn)行水洗，吸去水分。

(七)復(fù)染

蕃紅染色液染色10 s后， 自來水沖洗。

(八)干燥，鏡檢

染色的結(jié)果，革蘭氏正反應(yīng)菌體都呈紫色，負(fù)反應(yīng)菌體都呈紅色。

擴(kuò)展資料

標(biāo)本干燥后即進(jìn)行固定，固定的目的有三個(gè)：

(1)殺死微生物，固定細(xì)胞結(jié)構(gòu)。

(2)保證菌體能更牢固的粘附在載玻片上，防止標(biāo)本水洗時(shí)被水沖洗掉。

(3)改變?nèi)玖蠈?xì)胞的通透性，因?yàn)樗赖脑|(zhì)比活的原生質(zhì)易于染色。

參考資料來源：百度百科-革蘭氏染色法

參考資料來源：百度百科-革蘭氏染色